Glycogen-Glo Assay

Glycogen-Glo™ Assay je rychlá a citlivá metoda pro detekci glykogenuv různých biologických vzorcích, jako jsou buněčné kultury nebo homogenizované tkáně. Stanovení využívá bioluminiscenční technologii a je tak schopná detekovat i malé změny v syntéze, ukládání a odbourávání glykogenů. Příprava vzorku zahrnuje jednoduchý lyzační protokol pomocí kyseliny a následnou neutralizaci přímo v jamce mikrotitrační destičky a eliminuje tak nutnost centrifugace, promývání a sběru buněk. Esej lze použít i pro "high-throughput" experimenty v destičkách s 384 jamkami.

Kit Glycogen-Glo využívá sérii enzymatických reakcí. Nejprve je glykogen naštěpen pomocí glukoamylázy na glukózové jednotky. Glukóza je pak v následném kroku detekována pomocí glukózdehydrogenázy ve spojení s bioluminiscenční technologií detekce NADH. Výsledkem je bioluminiscenční signál úměrný počáteční koncentraci glykogenu ve vzorku.

U vzorků, které obsahují volnou glukózu i glykogen, je nutné provést dvě stanovení. V jednom vzorku se naštěpí glykogen pomocí glukoamylázy a změří se celková koncentrace glukózy. V druhém vzorku se pak změří pouze volná glukóza a z rozídlu obou hodnot se spočítá celková koncentrace glykogenu.