Kontaminace mykoplazmy v buněčných kulturách: Příčiny, problémy a řešení

Kontaminace buněčných kultur mykoplazmaty může vážně ovlivnit spolehlivost, reprodukovatelnost a konzistenci výsledků vašich experimentů. Představuje velkou výzvu pro výzkum i výrobu bioproduktů.

Kontaminace mykoplazmou se obtížně zjišťuje, a proto může její přítomnost zůstat neodhalena po celé měsíce. Ve skutečnosti se odhaduje, že více než 10 % všech buněčných kultur je kontaminováno druhem Mycoplasma. Z toho vyplývá důležitost rutinního testování, abyste se ujistili, že pracujete s nekontaminovanými kulturami.

Co je to Mykoplazma?

Mycoplasma patří do třídy Mollicutes, kam patří mimo jiné Acholeplasma a Ureaplasma. Mollicuty jsou grampozitivní bakterie, ale na rozdíl od ostatních druhů nemají buněčnou stěnu, a mohou tak nabývat různých tvarů. Pro označení všech druhů třídy Mollicutes se často používá termín Mycoplasma.

Druhy Mycoplasma jsou v přírodě rozšířené jako parazité savců (včetně člověka), plazů, hmyzu a rostlin. Jsou to nejmenší a nejjednodušší samo replikující se prokaryota o velikosti pouhých 0,2-0,8 µm. S genomem o velikosti pouhých 0,58-2,20 Mb mají druhy Mycoplasma omezené biosyntetické schopnosti, a proto jsou ve většině případů závislé na svých hostitelích.

10 tipů pro kultivaci buněk bez mykoplazmy

Používejte vhodné osobní ochranné pomůcky (rukavice, čistý laboratorní plášť, ochranné brýle) a dezinfikujte si rukavice.
Před zahájením práce a mezi jednotlivými kroky buněčné kultivace, otřete pracovní plochy.
Vyvarujte se mluvení nebo kýchání při práci s buňkami.
Vyvarujte se vystříknutí látek, rozlití tekutin a produkci aerosolů.
Pro každou buněčnou linii použijte určené lahve s médii.
Pravidelně čistěte inkubátor včetně misky na vodu.
Nezapomínejte na pravidelné vyprazdňování a čištění vodní lázně.
Testujte nové buněčné kultury na přítomnost mykoplazmy několik dní po rozmrazení.
Všechny buněčné kultury nově přicházející do laboratoře dejte do karantény, dokud nebudou testovány na přítomnost mykoplazmy.

Nebezpečí - Mykoplazma.png

Nezapomeňte provádět pravidelné testování buněk na přítomnost mykoplazmy každý druhý týden.

Řešení problémů kontaminace mykoplazmou

Máme pro vás hned několik řešení v podobě luminiscenčních kitů MycoAlert, prevence kontaminace mykoplazmou v podobě antibiotických a antimetabolických přípravků MycoZap od společnosti Lonza nebo luminometr pro měření chemiluminiscence a bioluminiscence Lucetta 2.

MycoAlert kity – Lonza

Mycoalert je univerzální bioluminiscenční metodou pro testování kontaminací v buněčných kulturách. Detekuje všechny běžné řády třídy Mollicutes (Mycoplasma, Acholeplasma, Entomoplasma a Spiroplasma, kromě Ureaplasma) a je určen pro měření v kyvetových nebo destičkových luminometrech a multi-mode readerech. Jedná se o pohodlnou a rychlou metodu:

– Jednoduše přidejte dvě reagencie do supernatantu kultivačního média
– Proveďte dvě měření luminiscence
– Výsledky za méně než 20 minut
– Jednoduchá interpretace výsledků

Katalogové číslo	Název
LT07-701	MycoAlert PLUS detection kit
LT07-518	MycoAlert Assay Control Set

Kompletní nabídka na detekci mykoplazmat v e-shopu

Prevence kontaminace mykoplazmaty – Lonza

MycoZapTM Plus-PR je roztok inovativních antibiotik připravený k použití pro ochranu buněčných kultur před širokou škálou běžných kontaminantů. Speciální složení přípravku MycoZapTM Plus-PR umožňuje spolehlivou a šetrnou ochranu primárních buněk, aby se zabránilo mikrobiální kontaminaci.

MycoZapTM Plus-CL je roztok inovativních antibiotik připravený k použití pro ochranu buněčných linií před širokou škálou běžných kontaminantů. Přípravek MycoZapTM Plus-PR lze používat kontinuálně a nahradit jím přípravek Pen/Strep.

Pokud došlo ke kontaminaci a vzorek nelze z určitých důvodů zlikvidovat, může MycoZap™ Mycoplasma Elimination Reagent odstranit detekovatelnou kontaminaci mykoplazmaty již za 4 dny s minimálními toxickými účinky na infikované buňky. Eliminuje mykoplazmu pomocí kombinace antibiotik a antimetabolických látek.