Trypsin Platinum - nejnovější pomocník pro bottom-up proteomiku

Analýza proteinů pomocí hmotnostní spektrometrie je závislá na úspěšné digesci pomocí proteáz. Nejčastěji používanou proteázou je jednoznačně trypsin. Ten je tradičně vyráběn extrakcí z hovězí nebo vepřové slinivky a následně je ošetřen pomocí TPCK, aby se potlačila jeho chymotrypsinová aktivita. Nicméně malé množství chymotrypsinu může zůstat tímto ošetřením neovlivněno a způsobovat nespecifické štěpení. Druhou možností výroby je pak exprese rekombinantního trypsinu v bakteriálních kulturách, kde je chymotrypsinová aktivita eliminována. Dalším častým jevem při použití trypsinu je jeho autoproteolýza, kdy dochází k postupné inaktivaci enzymu a znečištění vzorku jeho fragmenty. S rostoucí citlivostí a rozlišením hmotnostních spektrometrů je žádoucí, aby tyto dva faktory byly eliminovány.

Obr. 1 Modelová protilátka Panitumumab byla štěpena přes noc při 37 °C a následně analyzována HPLC s UV detekcí. Použitý poměr trypsin:protein byl 1:10, přičemž vzorek A byl štěpen nativním Trypsinem Mass Spectrometry Grade a vzorek B novým rekombinantním Trypsinem Platinum.

Jako odpověď na tyto požadavky uvádí Promega na trh novou verzi svého trypsinu. Trypsin Platinum je rekombinantní trypsin, který má díky upravenému složení maximální odolnost vůči autoproteolýze a nemá detekovatelnou nespecifickou proteolytickou aktivitu (viz obr. 1). Každá šarže je navíc kontrolována pomocí hmotnostní spektrometrie, aby byly maximálně zajištěny konzistentní proteolytické vlastnosti a tím i robustní a opakovatelná data. Díky tomu poskytuje nejspolehlivější výsledky při bottom-up proteomických analýzách. Enzym je zatím dostupný na vyžádání skrz tzv. Elite Access, ale již brzy bude k dostání i jako standardní produkt. V případě zájmu nás neváhejte kontaktovat.

Rychlý kontakt: Ing. Vojtěch Ledvina, Ph.D. +420 725 320 796, vojtech.ledvina@eastport.cz